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betway必威体育官网分析中常见问题之压力升高

         betway必威体育官网已经成为研发、药物质量控制和环境分析领域的关键技术,进行HPLC分析时,常会出现一些问题。

一、压力突然上升

      压力突然上升可对液相系统和色谱柱堵塞位置进行排查:

      从后往前排查堵塞位置(检测器出口排废液处->检测器入口端->柱出口->柱入口->AS出口端->AS入口端->泵

1.样品中不溶物的影响

       制剂、生物样品、食品、化妆品实际样品中的不溶物容易堵塞色谱柱和系统,使压力突然上升。

       建议优化前处理方法,充分过滤样品(0.22μm滤膜)或者进行离心分离,并使用预柱。

2.含盐流动相在系统中发生缓冲盐结晶的析出

   (在使用高浓度盐的梯度条件时,更要特别注意)

       要提前了解所用盐的溶解性

       当出现盐析时,用含2.5%有机相的水溶液,以较低流速缓慢

       冲洗色谱柱,待压力恢复正常后再逐渐更换为流动相    

3.固定相的破坏

       色谱柱受到强烈的震荡及碰撞会导致固定相的塌陷,从而引起压力的上升,并且通常会出现色谱峰的拖尾和分裂。

二、压力逐渐上升

    1.样品溶液中基质的吸附

           建议使用对基质有洗脱能力且温和的溶剂来进行冲洗。

    2.色谱柱寿命

           色谱柱寿命和所分析样品及流动相条件有很大关系。在强酸、强碱、高温及分析物不纯时都容易劣化。当压力的上升伴随着峰形变差及保留时间的改变时,建议您更换新色谱柱。 

    3.缓冲液(磷酸盐等缓冲液)中易产生的微生物

           建议分析时现配流动相,并进行过滤。